Detector ultraviolet DWD-1 (lungime de undă dublă cu fascicule duble de înaltă performanță)

Intervalul de lungimi de undă: 254nm, 280nm (detectare simultană), și alte două lungimi de undă opționale între liniile spectrale 254nm, 280nm-400nm pentru a detecta simultan.

Caracteristici ale instrumentului DWD-1

Determinarea lungimii de undă dublă a proteinelor 280nm/254nm:

Moleculele de proteine conțin aminoacizi aromatici, cum ar fi tiroina și tranina cu legături duble conjugate. Ele au proprietățile de absorbție a luminii ultraviolete, vârful lor de absorbție la lungimea de undă 280 nm, iar valoarea densității optice a vârfului absorbit în această lungime de undă este proporțională cu concentrația sa, prin urmare, poate fi folosită ca bază pentru calificarea și măsurarea cantitativă a proteinelor, din acest motiv, absorbția ultravioletă la 280nm este de obicei utilizată pentru monitorizarea continuă a concentrației de proteine în sistemul de stratificare. Cu toate acestea, deoarece conținutul de tiroină și tranină din diferite proteine diferă, pentru a determina cantitatea exactă, este necesar să se compară proteina pură ca standard sau să se cunoască deja factorul de atenuare a luminii ca referință. În plus, o mulțime de substanțe non-proteinoase au, de asemenea, o capacitate de absorbție determinată la lungimi de undă de 280 nm, ceea ce poate provoca interferențe. Acestea sunt mai grave în special în cazul acizilor nucleici (purine și pirimidine). Absorbția la 280 nm este de 10 ori mai puternică (pe gram) decât proteinele, dar acidul nucleic este mai puternic la 254 nm, cu vârful său de absorbție în apropierea 254 nm. Coeficientul de atenuare la 254nm este de două ori mai mare decât la 280nm.

Proteinele, dimpotrivă, au o absorbție ultravioletă de 280 nm mai mare decât cea de 254 nm.

De obicei.：

Raportul de absorbție a luminii pentru proteine pure: A280/A254” 1,8

Raportul de absorbție a luminii pentru acidul nucleic pur: A280/A254

Prin urmare, atunci când acidul nucleic este prezent simultan în soluția de proteine (ceea ce este cazul în majoritatea sistemelor biologice), OD254nm trebuie determinat simultan cu OD280nm. Apoi, în funcție de raportul dintre absorbția celor două lungimi de undă, conținutul real de proteine a fost calculat prin formula empirică pentru a elimina efectul acidului nucleic.

Concentrația proteinelor: 1,45 x A280 – 0,74 x A254 (mg/ml)

Această formulă empirică a fost stabilită prin intermediul unei serii de date determinate de un amestec de proteine (enolorizază de drojdie) și de acizi nucleici (nucleic acid de drojdie) în proporții cunoscute de concentrații diferite.